什么時候需要穩(wěn)定細(xì)胞株？

　　以下實驗，構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株而不是瞬時轉(zhuǎn)染更能滿足實驗要求：

　　1)外源片段在分裂細(xì)胞中長期(>2周)穩(wěn)定表達。雖然普通轉(zhuǎn)染實驗一般只能保證2-4天的轉(zhuǎn)染和表達效率，但腺病毒載體在多數(shù)分裂細(xì)胞中可以維持2-4周內(nèi)的高轉(zhuǎn)染效率和表達周期。而非分裂細(xì)胞，可以使用腺相關(guān)病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)外源基因，因為腺相關(guān)病毒載體在許多非分裂細(xì)胞中可以保持長達1年的高效表達。

　　2)需要構(gòu)建使用誘導(dǎo)表達系統(tǒng)，這主要是由于：

　　a)過表達基因或者干擾目的基因引起細(xì)胞毒性或者抑制細(xì)胞生長等不利因素;

　　b)目的基因的過表達或者干擾需要時空特異性。

　　3)希望控制目的基因過表達或者干擾的拷貝數(shù)，以避免引入人為因素影響實驗結(jié)果的精確性。構(gòu)建穩(wěn)定株可以幫助篩選拷貝數(shù)適量的細(xì)胞進行實驗研究。

　　4)部分細(xì)胞種類，病毒載體亦無法達到高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，通過構(gòu)建穩(wěn)定株，達到外源片段的高效表達。

　　5)長期在少數(shù)幾類細(xì)胞中研究幾個基因的功能，通過構(gòu)建穩(wěn)定株，可以大大降低頻繁轉(zhuǎn)染或者病毒包裝的成本，也極大方便實驗研究。

　　6)部分蛋白穩(wěn)定性*，瞬時RNA干擾因為作用周期短，只能抑制目的基因的表達，但無法去除已經(jīng)表達的目的蛋白，所以需要通過構(gòu)建穩(wěn)定株實現(xiàn)更好的基因干擾效果。

　　7)需要往動物體內(nèi)注射表達有外源片段的細(xì)胞。需要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株，以防止注射入動物體內(nèi)后，很快外源片段表達丟失。

　　8)細(xì)胞個體差異(同一類細(xì)胞，不同個體細(xì)胞基因組存在差異)對實驗結(jié)果有干擾，需要構(gòu)建單克隆細(xì)胞株去除干擾。

　　9)需要將外源片段插入基因組中，比如基因敲除，基因插入突變篩選等修飾基因組的實驗。