黑色素瘤細胞株在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞株能繼續(xù)生長，同時也將細胞株數(shù)量擴大，就必須進行傳代（再培養(yǎng)）。傳代培養(yǎng)也是一種將細胞株種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)黑色素瘤細胞株進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型黑色素瘤細胞株直接分瓶就可以，而貼壁細胞株需經(jīng)消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化貼壁細胞株成單個細胞株，也可加入乙二胺四乙酸（EDTA）提高消化能力，EDTA 是一種二價離子的螯合劑，能抑制黑色素瘤細胞株膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細胞株消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA，一般用不含Ca2+和Mg2+的鹽溶液配置，先用胰酶-EDTA 消化液清洗細胞株（5.0 -10.0 ml/75cm），然后棄去消化液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask) ，觀察細胞株直到細胞株變圓脫離瓶壁，此過程一般需要5-15分鐘，為了避免細胞株成團，消化黑色素瘤細胞株的過程中不要拍打細胞株瓶。對于特別難消化的細胞株，可以加入胰酶EDTA 消化液后把細胞株置于37°C 促進消化，細胞株脫離瓶壁后，立刻加入含有血清的*培養(yǎng)基中止消化，血清中某些蛋白質(zhì)能夠抑制胰酶的活性。一般情況下，離心并不需要。如果
黑色素瘤細胞株需要無血清或者低血清的培養(yǎng)基，可以以125000g 轉速離心5分鐘，然后棄去中止用的培養(yǎng)基，加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細胞株，移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細胞株類型而定，一般是1:2-1:20，具體比例可參考說明書。胰蛋白酶會對某些細胞株的黑色素瘤細胞株膜產(chǎn)生損傷，對于這種類型的細胞株，可用細胞株刮輕輕刮下細胞株，加入適量的培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻細胞株，然后進行傳代培養(yǎng)。
為了防止因污染或技術原因使長期培養(yǎng)功虧一簣，考慮到培養(yǎng)黑色素瘤細胞株因傳代而遲早會出現(xiàn)變異，有時因寄贈、交換和購買，培養(yǎng)細胞從一個實驗室轉運到另一個實驗室，*的策略是進行低溫保存。這對于維持一些特殊黑色素瘤細胞株的遺傳特性極為重要。現(xiàn)簡要介紹深低溫保存法(-70℃~-196℃)的特點。細胞深低溫保存的基本原理是：在-70℃以下時，細胞內(nèi)的酶活性均己停止，即代謝處于*停止狀態(tài)，故可以長期保存。細胞低溫保存的關鍵，在于通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度范圍內(nèi)，水晶呈針狀，極易招致細胞的嚴重損傷。
傳代黑色素瘤細胞株可提供復蘇，凍存細胞，ATCC細胞。具體可根據(jù)科研人員要求決定。代做各種細胞服務。
對于貼壁細胞應先吸（倒）盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使黑色素瘤細胞株基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或實驗。
